<cite id="mwmry"></cite>

    <tt id="mwmry"></tt>

  1. <cite id="mwmry"></cite> <cite id="mwmry"><span id="mwmry"></span></cite>

    <rp id="mwmry"><menuitem id="mwmry"><strike id="mwmry"></strike></menuitem></rp>

  2. <b id="mwmry"><form id="mwmry"></form></b>

      <rt id="mwmry"></rt>
      <video id="mwmry"><meter id="mwmry"></meter></video>

    1. 夏銘崎 趙建增
      華威特(北京)生物科技有限公司


          摘要:使用豬瘟兔化弱毒株(C株)疫苗能有效地控制豬瘟。但我國已實施大面積強制免疫多年,豬瘟免疫失敗卻仍時有發生。根據現在執行的豬瘟疫苗制造與檢驗辦法,豬瘟脾淋苗、豬瘟原代細胞及豬瘟傳代細胞苗三類商品化弱毒疫苗在制造和檢定中可能在原材料的純凈度、疫苗抗原劑量的設計及疫苗的穩定性幾個環節仍有潛在的質量管理風險存在,這些因素會影響到防疫方案的設計與實施。認識并避免這些問題的發生可以科學提高豬瘟防疫的質量。


          豬瘟(Classical Swine Fever, CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種嚴重危害養豬業的急性、烈性和接觸性傳染病,可引起豬的高熱稽留、全身廣泛性出血、母豬繁殖障礙等一系列癥狀[1] 。


          免疫疫苗是控制本病的有效手段。20世紀50年代,我國學者通過將豬瘟石門系強毒在兔體上連續傳代數百代后成功培育出豬瘟兔化弱毒疫苗株(Chinese strain,C-strain),取得了豬瘟防疫劃時代的突破。該疫苗毒可同時誘導體液免疫和細胞免疫應答,誘導產生完全的臨床保護和“病毒學”保護[2,3],對不同基因型的CSFV野毒均能提供有效的保護[4,5]。很多國家借助C株疫苗成功消滅了豬瘟[6]。但在我國,大面積強制免疫并沒有有效控制豬瘟流行,許多地區仍發生不同程度的豬瘟疫苗免疫失敗,臨床伴有發病溫和、帶毒率高、持續感染等現象,個別地區甚至偶爾會出現暴發性感染[7]。


          影響豬瘟疫苗免疫效果的因素眾多,除了豬群的健康狀況外,生產中仍有來自疫苗質量方面的因素在影響豬瘟免疫效果。本文謹就豬瘟疫苗生產及其質量控制進行簡要的論述。


          一、評價豬瘟疫苗質量的關鍵技術指標


          對于疫苗產品,影響其效力的技術指標主要包括制備疫苗所使用的菌(毒)株、抗原劑量、抗原純度、抗原穩定性等因素,滅活疫苗的效力還受所使用佐劑的影響。制備時使用的毒(菌)株的抗原性決定其誘導的免疫力是否能夠對抗流行病原體。刺激免疫應答需要一定量的抗原,過低不足以刺激有效的免疫應答,過高則可能會導致免疫麻痹。生產和使用方案均需要考慮合理的抗原劑量。疫苗中污染其他病原體會給豬群造成新的疾病,會損害豬的免疫應答能力,還可引起應激反應,因而在生產和使用疫苗時均需要重視抗原的純度。如果疫苗的穩定性不過關,疫苗在運輸與保存過程中,其抗原劑量會不斷下降而達不到預期的效力水平。


          二、豬瘟疫苗的種類及特點


          影響豬瘟疫苗質量的技術因素主要包括生產與檢驗兩個方面。不同生產工藝制備的疫苗其抗原含量不同,生產工藝中影響疫苗效價的因素主要包括病毒對易感動物或細胞的適應性,病毒培養條件的優化,原輔材料的純凈性,凍干工藝等。應用不同檢驗方法對豬瘟半成品及豬瘟疫苗進行檢驗,檢測方法的穩定性、可靠性、可重復性則直接決定了疫苗的品質。


          我國現在使用的豬瘟疫苗基本上全部由C株疫苗毒制備。根據抗原生產工藝不同,可把生產應用的疫苗劃為三類:豬瘟脾淋苗、豬瘟原代細胞苗、豬瘟傳代細胞苗。


          豬瘟脾淋苗系用豬瘟兔化弱毒株接種家兔,選擇定型熱和輕熱反應兔,從體溫下降及其以后的24小時內剖殺,以無菌手術采取脾臟和淋巴結(簡稱脾淋),制成乳劑,加適宜穩定劑,經冷凍真空干燥制成[8]。脾淋苗免疫原性良好,但疫苗質量受兔源影響較大,對家兔品種、體重、健康狀況有嚴格要求。近年來由于受兔源限制,生產廠家難以選擇到優質大耳白兔,應用其他品種兔源制備脾淋毒,難以產生定性熱或輕熱反應。脾淋苗難以批量化生產,易污染雜菌、感染外源病毒,疫苗批間差異大,如果在生產中混入其他兔體組織,易引起嚴重的過敏反應。


          豬瘟原代細胞苗系用豬瘟兔化弱毒株接種犢牛睪丸或羔羊腎原代細胞培養,收獲細胞培養物,加適宜穩定劑,經冷凍真空干燥制成[8]。豬瘟原代細胞苗相對于脾淋苗易于規?;a。它需要選用非豬瘟疫區,無口蹄疫、黏膜病等傳染病地區的1~4日齡健康小公牛睪丸或10日齡以內的健康羔羊腎細胞制備[8],但在我國牛群中BVDV(牛病毒性腹瀉)帶毒率高,制備疫苗需要的原代細胞來源并不充裕。如果應用感染BVDV的原代細胞制備豬瘟細胞苗,可使免疫豬感染BVDV,出現腹瀉、流產等癥狀。另外,病毒在原代細胞上適應時間短,復制效率低,難以制成高效價的豬瘟細胞苗。


          采用豬睪丸傳代細胞系或牛睪丸傳代細胞系增殖豬瘟病毒[9]系最有效的豬瘟抗原病毒制備方法,國際上通常也采用此法制備豬瘟疫苗。豬瘟弱毒疫苗在這兩種傳代細胞系穩定高效復制、可避免被BVDV等病原污染,能滿足我國當前復雜的豬瘟防疫需要。


          三、豬瘟疫苗效力檢驗方法


          豬瘟病毒對生產和檢驗細胞不產生細胞病變(nCPE),這給豬瘟疫苗的效力檢驗帶來了一定的困難。進行效力檢驗的方法有三種:豬效檢法、兔效檢法、FAID50(50% fluorescent antibody infective dose)法測定。
      豬效檢法系根據實驗免疫豬對強毒攻擊的保護情況來確定疫苗的效力。將稀釋疫苗肌肉注射5頭豬瘟抗體陰性的健康易感豬,10~14日后連同對照豬5頭肌肉注射攻擊豬瘟石門系血毒。結果對照豬應全部發病,且至少死亡3頭;免疫豬全部健活或稍有體溫反應,但應無豬瘟臨床癥狀[8]。能保護全部免疫豬存活且無臨床發病,即視為疫苗合格。用豬進行效力檢驗是豬瘟疫苗效力檢驗方法的金標準,但是需要采用石門系血毒進行檢驗,而豬瘟強毒的使用存在極大的生物安全風險,一旦出現向豬群的擴散,可能會導致豬瘟大面積爆發。由于它對動物設施要求嚴格,毒種的取得也比較困難,費時費力,成本高,目前大多數生產企業很少用此法做豬瘟疫苗效力檢驗。


          兔效檢法系根據實驗兔對疫苗的熱反應來確定疫苗病毒抗原的劑量。將疫苗稀釋后接種家兔,接種后,上、下午各測體溫1次,48小時后,每隔6小時測體溫1次,根據體溫反應和攻毒結果進行綜合判定。當2只兔均呈定型熱反應(++),或1只兔呈定型熱反應(++)、另1只兔呈輕熱反應(+)時,疫苗判為合格[8]。受兔源品種、體重、健康狀況、個體差異及保定方法等影響,部分家兔不易產生定型熱或輕熱反應,或易出現其它無法判定的情況。所以,兔效力檢驗法允許重復檢驗,總檢驗次數可不超過3次。只要3次內任何一次檢驗結果成立,該批疫苗檢驗即算合格。目前市面上流通的豬瘟疫苗均采用此方法進行效力檢驗。


          FAID50測定是指應用免疫熒光方法對病毒半數組織感染量進行測定的一種方法。把豬瘟疫苗毒按不同的稀釋度接種到傳代細胞上增殖,通過熒光色素標記抗體與細胞表面及細胞漿內的豬瘟抗原結合后,置熒光顯微鏡下觀察,細胞漿中出現特異性綠色熒光為病毒陽性。中華人民共和國農業部第2270號公告已在《高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟二聯活疫苗(TJM-F92株+C株)制造及檢驗試行規程》中確認FAID50為豬瘟疫苗部分效力檢驗方法。應用本法可對豬瘟病毒在細胞水平進行更準確的定量,因而在制備疫苗的過程中根據需要隨時定量,進行質量控制。一般在配苗前綜合考慮豬瘟抗原半成品病毒含量、疫苗保存期末劑量要求、凍干過程中及保存期可能的抗原劑量損失等因素,通過特定公式計算確定每批疫苗所需豬瘟抗原液用量,這樣可以確保每批產品在保存期內的劑量在預期的標準范圍內,減少產品批間差。使用這一技術可使豬瘟疫苗質量達到國際水平。


          四、凍干保護技術


          疫苗的臨床效力與出廠后疫苗抗原穩定性有很大的關系,凍干保護劑的組成決定了疫苗的穩定性,進而影響到疫苗的效價和質量。掌握生物穩定技術,不但能幫助控制產品質量,還可提高對產品性能判斷的可靠性,為制訂臨床應用方案提供依據。我國現階段常用的生物制品保護劑主要為蔗糖脫脂牛奶和明膠,其對產品的保護能力不充分,因而要求相應制品于低溫保存(-15℃),給獸用生物制品的保存、運輸、使用等帶來許多困難和不便。生產中許多免疫失敗可能源于疫苗在保存或運輸過程中效價降低,因而可以說,凍干保護劑是一個關乎當前我國獸用疫苗質量的關鍵技術。


          近年來我國已加大對耐熱凍干保護劑的研究,耐熱凍干技術迅速提高,部分已達到發達國家的水平??茖W的耐熱凍干保護劑更周到地考慮了在較高溫度和較長時間保存時可能的物理和化學變化及這些因素對凍干活疫苗活性的影響,比傳統凍干保護劑更能有效地保護疫苗,保存時間更長久,可將普通凍干疫苗的保存溫度由-15℃提高到2~8℃,且保存期達到18個月以上。解決了成品疫苗由于保存或運輸原因引起的效價降低甚至失效問題。


          五、免疫方案與疫苗質量的關系


          在我國,由于原有生產工藝與檢驗方面存在上述一些技術瓶頸,導致豬瘟疫苗的長期應用方案出現一些變化。例如,在臨床應用中常出現任意加大豬瘟疫苗免疫劑量的情況,少則一頭豬注射4頭份豬瘟疫苗,多則甚至有一頭豬注射幾十頭份或上百頭份豬瘟疫苗,而實際注射入豬體內的抗原量是多少不得而知。究其原因,長期的免疫不足導致各階段的豬群出現了多方面的潛在問題。母豬免疫不足導致仔豬的免疫方案不確定、不均一,全群的免疫不足導致野毒隱性感染增加,形成繼發感染等鏈索問題。通過對豬瘟抗原進行準確定量,對豬瘟疫苗生產與檢驗各個環節進行嚴格把關,消除了豬瘟免疫失敗的第一誘因,通過精細化的免疫監測及時優化免疫和防疫方案,通過免疫在區域豬群中徹底凈化豬瘟不再是夢想。


      參考文獻:
      [1] Moennig, V., Introduction to classical swine fever: virus, disease and control policy. Veterinary microbiology, 2000, 73: 93-102.
      [2] Biront, P., et al. Inhibition of virus replication in the tonsils of pigs previously vaccinated with a Chinese strain vaccine and challenged oronasally with a virulent strain of classical swine fever virus. Veterinary microbiology, 1987, 14: 105-113.
      [3] Dahle, J., et al. Assessment of safety and protective value of a cell culture modified strain "C" vaccine of hog cholera/classical swine fever virus. Berliner und Munchener tierarztliche Wochenschrift, 1995, 108: 20-25.
      [4] Tu, C., et al. Phylogenetic comparison of classical swine fever virus in China. Virus research, 2001, 81: 29-37.
      [5] Vandeputte, J., et al. Classical swine fever: the European experience and a guide for infected areas. Revue scientifique et technique, 1999, 18: 638-647.
      [6] Vandeputte, J., et al. Classical swine fever: the European experience and a guide for infected areas. Revue scientifique et technique, 1999, 18: 638-647.
      [7] 杜念興. 豬瘟的回顧與展望. 中國畜禽傳染病,1998,5,317~319.
      [8] 中華人民共和國獸用生物制品規程,二OOO年版,中華人民共和國農業部。
      [9] 獸用生物制品質量標準匯編(2012),中國獸醫藥品監察所、農業部獸藥評審中心組編,中國農業出版社。


      2016年03月28日

      豬瘟免疫與有效防控
      豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟二聯活疫苗獲國家發明專利

      上一篇

      下一篇

      豬瘟病毒弱毒疫苗的質量標準及質量控制

      文章中心
      Article center

      本網站由阿里云提供云計算及安全服務 Powered by CloudDream
      十分彩